Identificación del lote
El encabezado debe contener el nombre del compuesto, el número de lote, la fecha de análisis y la cantidad nominal por vial. Si el número de lote del documento no coincide exactamente con el impreso en el vial, el documento no describe ese material y no puede usarse como respaldo analítico.
Pureza cromatográfica (RP-HPLC)
La pureza se expresa como porcentaje de área del pico principal en un cromatograma de fase reversa, normalmente con detección UV a 214 nm, donde absorbe el enlace peptídico. El valor depende del método: conviene revisar la columna, el gradiente de acetonitrilo y agua con ácido trifluoroacético, el flujo y el tiempo de retención.
Un porcentaje sin cromatograma adjunto no es verificable. El trazo permite distinguir un pico único y simétrico de un pico ancho que integra impurezas coeluyentes.
Identidad por espectrometría de masas
La pureza no confirma identidad. El espectro ESI-MS debe reportar la masa monoisotópica u observada frente a la calculada a partir de la fórmula molecular; las diferencias aceptables suelen situarse en el orden de una unidad de masa para péptidos de cadena media obtenidos en instrumentos de baja resolución.
Contraión, agua y sales residuales
La mayoría de los péptidos sintéticos se aíslan como sales de acetato o trifluoroacetato. El contraión y el contenido neto de péptido cambian la masa real de la molécula presente en el vial, un dato imprescindible al calcular concentraciones molares en solución.
- Contraión declarado (acetato o trifluoroacetato).
- Contenido neto de péptido, cuando se determina por análisis de aminoácidos o balance de masa.
- Contenido de agua por Karl Fischer o pérdida por secado, cuando aplica.
Señales de un documento débil
Un COA genérico sin número de lote, sin fecha, sin cromatograma o con capturas de baja resolución no permite auditar nada. Lo mismo ocurre cuando el documento reutiliza el mismo trazo para compuestos distintos o cuando la masa reportada no corresponde a la fórmula declarada.
Referencias
- Mant CT, Chen Y, Yan Z, et al. HPLC analysis and purification of peptides. Methods Mol Biol. 2007;386:3-55.
- Fenn JB, Mann M, Meng CK, Wong SF, Whitehouse CM. Electrospray ionization for mass spectrometry of large biomolecules. Science. 1989;246(4926):64-71.