Equilibrado previo
El vial se deja alcanzar temperatura ambiente antes de abrirlo. Abrir un vial frío favorece la condensación de humedad ambiental sobre el polvo, lo que introduce agua no contabilizada y acelera la hidrólisis.
Elección del disolvente
El disolvente se elige según el perfil de solubilidad del compuesto. El agua bacteriostática con alcohol bencílico al 0.9% es habitual para péptidos hidrofílicos en trabajo de banco; las secuencias con alta proporción de residuos hidrofóbicos pueden requerir un paso previo con ácido acético diluido, bicarbonato de amonio o dimetilsulfóxido antes de diluir en medio acuoso.
Adición y disolución
El volumen calculado se agrega dejando escurrir el disolvente por la pared interior del vial, no directamente sobre la torta liofilizada. Se gira suavemente hasta obtener una solución límpida. La agitación vigorosa o el vórtex prolongado generan espuma e interfaces aire-líquido que favorecen la agregación.
Cálculo de concentración
La concentración resultante es la masa nominal del vial dividida entre el volumen añadido. Para expresarla en unidades molares se usa el peso molecular declarado en la ficha técnica, corrigiendo por contenido neto de péptido cuando el COA lo reporta.
- 5 mg en 2 mL equivalen a 2.5 mg/mL.
- 10 mg en 5 mL equivalen a 2 mg/mL.
- Registrar volumen, fecha y número de lote en la etiqueta de la alícuota.
Alicuotado
Dividir la solución en alícuotas de un solo uso evita ciclos repetidos de congelación y descongelación, que son la causa más frecuente de pérdida de material en solución. Se recomiendan viales de polipropileno de baja adsorción.
Referencias
- Manning MC, Chou DK, Murphy BM, Payne RW, Katayama DS. Stability of protein pharmaceuticals: an update. Pharm Res. 2010;27(4):544-575.
- Wang W. Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals. Int J Pharm. 2000;203(1-2):1-60.